Sarcoma sinovial pobremente diferenciado de pared del tórax con características rabdoides / Poorly differentiated synovial sarcoma of the chest wall with rhabdoid features

Presentamos un caso de sarcoma sinovial (SS) pobremente diferenciado con características rabdoides. Mujer de 33 años remitida a nuestra institución con un tumor de la pared torácica que en la resonancia magnética reveló masa difusa que invadía la pleura y se extendía hacia el esófago, la aorta, el diafragma y el páncreas. La neoplasia estaba compuesta por células pequeñas/medianas con morfología rabdoide compuesta por núcleos redondos, algunos excéntricos, nucléolos pequeños y citoplasma eosinofílico. Los estudios inmunohistoquímicos demostraron que las células tumorales fueron reactivas para TLE1, Bcl-2, EMA, CAM5.2, CD138 y CD56, y negativas para desmina, actina de músculo liso y proteína S100. Mediante la técnica de hibridación in situ con fluorescencia, realizada en cortes de parafina, los núcleos de células tumorales mostraron reordenamiento SS18. Se hizo el diagnóstico de SS pobremente diferenciado con características «rabdoides». Este es el 8.° caso, de un SS con características «rabdoides» informado en la literatura.(AU)

We report a rare case of a poorly differentiated synovial sarcoma (SS) with rhabdoid features. A 33-year-old woman was referred to our hospital with a chest wall tumor. MRI revealed a diffuse mass that invaded the pleura and extended into the esophagus, aorta, diaphragm and pancreas. Histopathological examination of the neoplasm showed it to be composed of sheets of small/medium cells with rhabdoid morphology, consisting of round, eccentrically localized nuclei, conspicuous nucleoli, and eosinophilic cytoplasm. Immunohistochemical studies demonstrated the tumor cells to be positive for TLE1, Bcl-2, EMA, CAM5.2, CD138 and CD56 and negative for desmin, smooth muscle actin or S100 protein. Fluorescent in-situ hybridization technique, performed on the paraffin section, showed SS18 gene rearrangement in the nuclei of the tumor cells. Poorly differentiated SS with “rhabdoid” features was diagnosed. This is only the 8th case of a SS with “rhabdoid” features reported to date.(AU)

[Poorly differentiated synovial sarcoma of the chest wall with rhabdoid features]. / Sarcoma sinovial pobremente diferenciado de pared del tórax con características rabdoides.

We report a rare case of a poorly differentiated synovial sarcoma (SS) with rhabdoid features. A 33-year-old woman was referred to our hospital with a chest wall tumor. MRI revealed a diffuse mass that invaded the pleura and extended into the esophagus, aorta, diaphragm and pancreas. Histopathological examination of the neoplasm showed it to be composed of sheets of small/medium cells with rhabdoid morphology, consisting of round, eccentrically localized nuclei, conspicuous nucleoli, and eosinophilic cytoplasm. Immunohistochemical studies demonstrated the tumor cells to be positive for TLE1, Bcl-2, EMA, CAM5.2, CD138 and CD56 and negative for desmin, smooth muscle actin or S100 protein. Fluorescent in-situ hybridization technique, performed on the paraffin section, showed SS18 gene rearrangement in the nuclei of the tumor cells. Poorly differentiated SS with "rhabdoid" features was diagnosed. This is only the 8th case of a SS with "rhabdoid" features reported to date.

Carcinoma tipo-linfoepitelioma pulmonar con expresión de virus de Epstein-Barr y PD-L1 / Pulmonary lymphoepithelioma-like carcinoma with ex pression of Epstein-Barr virus and PD-L1

Resumen El carcinoma tipo-linfoepitelioma pulmonar es una variante rara de carcinoma de células no pequeñas de pulmón, representa aproximadamente 0.7% de todos los casos. Está usualmente asociado con la infección por el virus de Epstein-Barr y es más prevalente en el Sureste de Asia; sin embargo, es extremadamente raro en Améri ca Latina. Informamos el caso de un hombre de 65 años de edad con un carcinoma tipo-linfoepitelioma pulmo nar, que se presentó con tos, disnea y pérdida de peso. La TAC de tórax mostró nódulo mal definido localizado en el pulmón derecho. Se realizó biopsia transtorácica de la lesión, y el estudio microscópico reveló células gran des poligonales dispuestas en mantos, infiltrados por abundantes linfocitos y células plasmáticas, alrededor del intersticio. Las células neoplásicas fueron positivas para citoqueratina 5/6 y p63, y negativas para Napsina A y el factor de transcripción tiroideo 1 (TTF-1). La expre sión de PD-L1 fue positivo (aproximadamente 100%) por inmunohistoquímica; así como el núcleo de las células neoplásicas mediante hibridación in situ para el RNA codificado por el virus de Epstein-Barr (EBER-ISH). El paciente recibió seis ciclos de un esquema combinado de quimioterapia basado en platino (gencitabina/cisplatino) más durvalumab. Presentó progresión de la enfermedad y finalmente murió 9 meses después del diagnóstico.

Abstract Pulmonary lymphoepithelioma-like carcinoma is a rare type of non-small cell lung cancer, it accounts for approximately 0.7% of all cases. It is usually associated with Epstein-Barr virus infection and is more prevalent in Southeast Asia; however, it is extremely rare in Latin America. We present a 65-year-old man with a primary pulmonary lymphoepithelioma-like carcinoma, who presented with cough, dyspnoea and weight loss. Com puter tomographic scan of the thorax showed a nodule localized in the right lung. A transthoracic biopsy of the lung lesion was made and the microscopic obser vation revealed large polygonal cells that proliferated in a nest pattern with infiltration by lymphocytes and plasma cells around the interstitium. The tumour cells were positive for citokeratin 5/6 and p63, and negative for Napsin A and thyroid transcription factor 1 (TTF-1). PD-L1 expression was positive (approximately 100%) in the immunohistochemical study, and the nuclei of the tumour cells were positive for EBV-encoded small RNA in-situ hybridization (EBER-ISH). The patient underwent six cycles of platinum-based combination (gencitabine/ carboplatin) chemotherapy plus durvalumab. He pre sented progression of the disease and finally he died 9 months after diagnosis.

Distribution of calcitonin gene-related peptide and vascular endothelial growth factor in the mouse lung at the embryonic and postnatal stages / Distribución del péptido relacionado con el gen de la calcitonina y el factor de crecimiento endotelial vascular en el pulmón de ratón en las etapas embrionaria y posnatal

SUMMARY: Neuropeptide calcitonin gene-related peptide (CGRP) is a neurotransmitter related to vasculogenesis during organ development. The vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) is also required for vascular patterning during lung morphogenesis. CGRP is primarily found in organs and initially appears in pulmonary neuroendocrine cells during the early embryonic stage of lung development. However, the relationship between CGRP and VEGF-A during lung formation remains unclear. This study investigates CGRP and VEGF-A mRNA expressions in the embryonic, pseudoglandular, canalicular, saccular, and alveolar stages of lung development from embryonic day 12.5 (E12.5) to postnatal day 5 (P5) through quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and in situ hybridization. Further, we analyzed the expression of CGRP via immunohistochemistry. The VEGF-A mRNA was mainly scattered across the whole lung body from E12.5. CGRP was found to be expressed in a few epithelial cells of the canalicular and the respiratory bronchiole of the lung from E12.5 to P5. An antisense probe for CGRP mRNA was strongly detected in the lung from E14.5 to E17.5. Endogenous CGRP may regulate the development of the embryonic alveoli from E14.5 to E17.5 in a temporal manner.

El péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP) es un neurotransmisor vinculado con la vasculogénesis durante el desarrollo de órganos. El factor de crecimiento endotelial vascular A (VEGF-A) también se requiere para el patrón vascular durante la morfogénesis pulmonar. El CGRP se encuentra principalmente en los órganos y aparece inicialmente en las células neuroendocrinas pulmonares durante la etapa embrionaria temprana del desarrollo pulmonar. Sin embargo, la relación entre CGRP y VEGF-A durante la formación de los pulmones sigue sin estar clara. Este estudio investiga las expresiones de ARNm de CGRP y VEGF-A en las etapas embrionaria, pseudoglandular, canalicular, sacular y alveolar del desarrollo pulmonar desde el día embrionario 12,5 (E12,5) hasta el día postnatal 5 (P5) a través de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real. (qRT-PCR) e hibridación in situ. Además, analizamos la expresión de CGRP mediante inmunohistoquímica. El ARNm de VEGF-A se dispersó principalmente por todo parénquima pulmonar desde E12,5. Se encontró que CGRP se expresaba en unas pocas células epiteliales de los bronquiolos canaliculares y respiratorios del pulmón desde E12,5 a P5. Se detectó fuertemente una sonda antisentido para ARNm de CGRP en el pulmón de E14,5 a E17,5. El CGRP endógeno puede regular el desarrollo de los alvéolos embrionarios de E14,5 a E17,5 de manera temporal.

Clinical and pathologic characteristics of gastric adenocarcinoma associated with Epstein-Barr virus in a region with a high incidence of gastric cancer in Colombia.

INTRODUCTION AND AIMS: Epstein-Barr virus (EBV) infection is an etiologic factor in EBV-associated gastric carcinoma (EBVaGC). The aim of our study was to describe the clinical and histopathologic characteristics of EBV infection in intestinal-type gastric adenocarcinoma samples. MATERIAL AND METHODS: Of 180 paraffin-embedded gastrectomy samples, 28 were studied. Chromogenic in situ hybridization was performed to detect EBV. Sociodemographic and histopathologic data were obtained from the patients' clinical histories. RESULTS: A total of 21.4% of the samples were positive for EBV. The predominant morphologic characteristic was the lace pattern, with dense inflammatory infiltration. Fifty percent of the EBVaGC+ patients were men, and the median age of the positive patients was 59 years (range: 50-75); 77.2% of the EBVaGC- patients were men, and the median age of the negative patients was 66 years (range: 34-89). Helicobacter pylori infection was associated with 10.7% of the EBVaGC+ patients and 53.6% of the EBVaGC- patients. In the EBVaGC+ patients, the cardia was the most frequent tumor location (17.9%), 7.1% had histologic grades 2 and 3, and 17.9% presented with Borrmann classification type III. In the EBVaGC- patients, the cardia and fundus were the most frequent tumor locations (71.4%), 35.7% had histologic grade 2, and 39.3% and 21.4% presented with Borrmann classification type III and IV, respectively. CONCLUSIONS: The present study describes the clinical and histopathologic characteristics associated with EBVaGC positivity. Those data may aid in the selection of cases that are candidates for analysis through molecular methods aimed at identifying EBV infection in intestinal-type gastric adenocarcinoma.

Citogenética de las hemopatías malignas en la era de la secuenciación / Cytogenetics of malignant hemopathies in the sequencing era

Las neoplasias hematológicas se caracterizan por un gran número y complejidad de alteraciones genéticas, desde la formación de genes de fusión a partir de translocaciones e inversiones cromosómicas hasta mutaciones génicas y alteraciones epigenéticas que han permitido la identificación de nuevos oncogenes y genes supresores de tumores responsables de su etiología. Al abordar el estudio genético de las leucemias se utilizan múltiples técnicas como la citogenética convencional, citogenética molecular (hibridaciónin situ por fluorescencia (FISH), esta última con una mayor sensibilidad, especificidad y rapidez que permiten el diagnóstico, la estratificación pronóstica y seguimiento de la enfermedad. Las técnicas anteriores se integran con técnicas de biología molecular, secuenciación génica, entre otras, que permiten el hallazgo de nuevos marcadores genéticos con una mejor caracterización de las hemopatías malignas y la posibilidad del desarrollo de nuevos fármacos específicos que actúen sobre la diana molecular. El objetivo fue revisar la utilidad de la citogenética y la secuenciación génica en el estudio de la leucemia mieloide aguda y la leucemia linfocítica crónica. Ante las ventajas, desventajas y limitaciones de estas técnicas genéticas es necesario utilizarlas de forma complementaria y nunca excluyente(AU)

Hematological neoplasms are characterized by a large number and great complexity of genetic disorders, from the formation of fusion genes after chromosomal translocations and inversions to gene mutation and epigenetic disorders that have permitted the identification of new oncogenes and tumor-suppressing genes responsible for their etiology. When addressing the genetic study of leukemias, multiple techniques are used, such as conventional cytogenetics, molecular cytogenetics, and fluorescence in situ hybridization (FISH), the latter having the higher degree of sensitivity, specificity and speed, which allow diagnosis, prognostic stratification and follow-up of the disease. The previous techniques are integrated with molecular biology techniques, gene sequencing, among others, which allow discovery of new genetic markers with better characterization of malignant hemopathies and the possibility of developing new specific drugs against the molecular target. The objective was to review the usefulness of cytogenetics and gene sequencing in the study of acute myeloid leukemia and chronic lymphocytic leukemia. Given the advantages, disadvantages and limitations of these genetic techniques, it is necessary to use them in as complementary but never exclusive management ways(AU)

Análisis clínico y citogenético de un caso de trastorno del desarrollo sexual testicular XX con SRY negativo / Clinical and Cytogenetic Analysis of a Case of SRY-Negative XX Testicular Disorder of Sex Development / Análise clínica e citogenética de um caso de transtorno do desenvolvimento sexual testicular XX com SRY-negativo

Resumen: El trastorno del desarrollo sexual (TDS) testicular XX es una patología que se presenta en un individuo con cariotipo 46,XX con un fenotipo anatómico de genitales externos masculinos, que pueden variar desde la normalidad hasta la ambigüedad genital. Clínicamente se han descrito dos subgrupos de hombres 46,XX con SRY-negativos y SRY-positivos, dependiendo de la presencia o no del gen SRY que normalmente se encuentra en el cromosoma Y participando en la determinación testicular. En este artículo se describen los antecedentes personales y los hallazgos clínicos de un infante con anomalías del meato urinario en el cual se identificó un complemento cromosómico 46,XX. También, se realizó hibridación in situ fluorescente en linfocitos de sangre periférica que demostró la ausencia del gen SRY y confirmó la presencia de dos cromosomas X.

Abstract XX testicular disorder of sex development (DSD) is a pathology that occurs in an individual with a 46,XX karyotype and an anatomical phenotype of male external genitalia, which may vary from normal to ambiguous. Clinically, two subgroups of SRY-negative and SRY-positive, 46, XX men have been described, depending on the presence of the SRY gene that is normally found on the Y chromosome participating in testicular determination. This article describes the personal history and clinical findings of an infant with urethral meatus abnormalities in whom a 46,XX chromosome set was identified. Also, fluorescent in situ hybridization was performed in peripheral blood lymphocytes which demonstrated the absence of the SRY gene and confirmed the presence of two X chromosomes.

Resumo: O transtorno do desenvolvimento sexual (TDS) testicular XX é uma patologia apresentada em um indivíduo com cariótipo 46,XX com um fenótipo anatômico de genitais externos masculinos, que podem variar da normalidade à ambiguidade genital. Clinicamente, são descritos dois subgrupos de homens 46,XX com SRY-negativos e SRY-positivos, dependendo da presença ou não do gene SRY que normalmente se encontra em Y cromossomo participando da determinação testicular. Neste artigo, são descritos os antecedentes pessoais e os achados clínicos de uma criança com anomalias de meato urinário em que foi identificado um complemento cromossômico 46,XX. Além disso, foi rea -lizada hibridação in situ fluorescente em linfócitos de sangue periférico que demonstrou a ausência do gene SRY e confirmou a presença de dois cromossomos X.

Validation of chromogenic in situ hybridization reactions for DNA and RNA detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissue / Validação das reações de hibridização in situ cromogênica para detecção de DNA e RNA em tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina

ABSTRACT Introduction: Chromogenic in situ hybridization (CISH) is used alternatively to the traditional immunohistochemical methods for the diagnosis of infectious diseases in formalin-fixed paraffin-embedded samples, since it presents high sensitivity and specificity. This type of sample undergoes several chemical modifications during histological processing, and both poor and excessive fixation can impair sample quality, making it difficult to obtain good results. In CISH, it is common to use positive samples as quality control for the reactions; however, this practice does not provide any information regarding the preservation of the genetic material, nor does it avoid false-negative results. Objective: The objective of this study was to validate the deoxyribonucleic acid (DNA) (+) and (-), and ribonucleic acid (RNA) (+) and (-) control probes to be used as quality control for the samples, evaluating preservation of the genetic material. Materials and methods: Twelve histological sections were used (in quadruplicate, n = 48), prepared from a pool of tissues without microscopic changes related to infectious and/or inflammatory processes. The CISH protocol was conducted according to the manufacturer's instructions, standardized under the conditions of our laboratory, using commercial DNA and RNA probes chemically linked to digoxigenin. Results and conclusion: Our results were very satisfactory, showing high reproducibility, accuracy, sensitivity and analytical specificity, high predictive values for positive and negative assays and with zero ratio of false-positive and false-negative results, allowing the validation of this reaction.

RESUMEN Introducción: La hibridación in situ cromogénica (CISH) es una alternativa a los métodos tradicionales inmunohistoquímicos para el diagnóstico de enfermedades infecciosas en muestras fijadas en formoly embebidas enparafina, puesto que tiene alta sensibilidad y especificidad. Este tipo de muestra sufre diversas modificaciones químicas durante elprocesamiento histológico, y tanto la mala fijación cuanto la fijación excessiva pueden perjudicar la calidad de las muestras, impidiendo buenos resultados. En la CISH, es común el empleo de muestras positivas para control de calidad de reacciones; sin embargo, esta práctica no proporciona ninguna información acerca de la preservación del material genético. Objetivo: El propósito de este estudio ha sido realizar la validación de las sondas comerciales para ácido desoxirribonucleico (ADN) (+) y (-) y ácido ribonucleico (ARN) (+) y (-), para que sean utilizadas como control de calidad, evaluando la preservación del material genético en las muestras testadas. Material y métodos: Se incluyen en el estudio 12 cortes histológicos (en cuadruplicado, n = 48), confeccionados a partir de un pool de tejidos sin alteraciones microscópicas relacionadas con procesos infecciosos y/o inflamatorios. El protocolo de CISH se desarrolló de acuerdo a las instrucciones del fabricante y bajo las condiciones del nuestro laboratorio, haciendo uso de sondas comerciales de ADN y ARN quimicamente ligadas a digoxigenina. Resultados y conclusión: Nuestros resultados han sido muy satisfactorios, demostrando alta reproducibilidad, exactitud, sensibilidad, y especificidad analítica, así como altos valores predictivos para ensayos positivos y negativos, y con proporción nula de falsos negativos y falsos positivos, lo que ha permitido la validación de esa reacción.

RESUMO Introdução: A hibridização in situ cromogênica (CISH) é uma alternativa aos métodos tradicionais imuno-histoquímicospara diagnóstico de doenças infecciosas em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina, visto que apresenta grande sensibilidade e especificidade. Esse tipo de amostra sofre diversas modificações químicas durante o processamento histológico, e tanto a má fixação quanto a fixação em excesso podem prejudicar a qualidade das amostras, inviabilizando bons resultados. Na CISH, é comum a utilização de amostras positivas como controle de qualidade das reações; entretanto essa prática não fornece nenhuma informação a respeito da preservação do material genético, nem evita resultados falso-negativos nas amostras testadas. Objetivo: O objetivo deste estudo foi realizar a validação das sondas comerciais para ácido desoxirribonucleico (DNA) (+) e (-) e ácido ribonucleico (RNA) (+) e (-), para serem utilizadas como controle de qualidade, avaliando apreservação do material genético nas amostras testadas. Materiais e métodos: Foram utilizados 12 cortes histológicos (em quadruplicata, n = 48), confeccionados a partir de um pool de tecidos sem alterações microscópicas relacionadas com processos infecciosos e/ou inflamatórios. O protocolo de CISH foi conduzido de acordo com as instruções do fabricante e padronizado conforme as condições do nosso laboratório, utilizando sondas comerciais de DNA e RNA quimicamente ligadas à digoxigenina. Resultados e conclusão: Nossos resultados foram muito satisfatórios, demonstrando alta reprodutibilidade, acurácia, sensibilidade e especificidade analítica, bem como altos valores preditivos para ensaios positivos e negativos e com proporção nula de resultados falso-negativos e falso-positivos, o que possibilitou a validação dessa reação.

[Tissue arrays: Two simple and economical methods for manual construction.] / Matrices tisulares: presentación de dos métodos sencillos y económicos de elaboración manual.

OBJECTIVES: Tissue array (TA) technologyis widely used as a method for the in situ investigation oftissue markers in cancer studies. A limitation of this techniqueis the high price of tissue arrayers. We describetwo easy and non-expensive manual methods, that haveproduced small and medium format arrays. MATERIAL AND METHODS: 16 TAs were manuallyconstructed from conventional paraffin blocks using twodifferent techniques. For the first method, a 16G Tru-Cutneedle whose bevel edge had been cut, was used tomake the holes in the donor blocks (80 cases) and thereceptor ones (resulting in 2 TAs each one with 55 casesand two with 25 cases). In the second technique, a 4mm-diameter punch for cutaneous biopsies was appliedto the donor blocks (obtaining 210 cylinders from 108blocks) and to the receptor ones (12 TAs). Hematoxylin-eosin, immunohistochemical and in situ hybridizationstains were performed on sections from these TAs. RESULTS: The tissue loss rate in the sections obtainedfrom the TAs constructed with the first method was26.5%, but as two cylinders were included from eachcase, at least one of them was retained. There was notany loss of tissue in the sections from the TAs constructedwith the second method. The results of all of the stainsperformed were successful. CONCLUSIONS: These two manual methods of elaborationof TAs result rather simple and they are economical.The tissue loss rate is significant in the first methodbut it can be compensated embedding more than onecylinder from each donor block. There was not anyproblem in the sectioning of the TAs constructed with thesecond method.

OBJETIVOS: La tecnología de matricestisulares (MTs) se ha implantado como método de trabajohabitual en la investigación de marcadores tisularesrelacionados con el cáncer. Su inconveniente esla necesidad de contar con un dispositivo especial deprecio elevado. Presentamos dos métodos manuales,económicos, que han sido válidos para construir MTsde pequeño y mediano formato.MATERIAL Y MÉTODOS: Se han elaborado 16 MTs deforma manual a partir de bloques convencionales deparafina, mediante dos técnicas diferentes. En la primerase utilizó una aguja Tru-Cut 16G a la que se cortó el bisel, para realizar los orificios en los bloques donantes(80 casos) y en los receptores (resultando dos MTs de55 casos y dos de 25 casos). Para la segunda técnicase utilizó un dispositivo "punch" para biopsias cutáneas,de 4 mm de diámetro, que se aplicó a los bloques donantes(obteniendo 210 cilindros de 108 bloques) y alos receptores (12 MTs). En las secciones de las MTs obtenidasse realizaron tinciones de hematoxilina-eosina,inmunohistoquímica (IHQ) e hibridación in situ. RESULTADOS: La tasa de pérdida de material en las seccionesobtenidas con el primer método fue del 26,5%,pero al haberse incluído dos cilindros de cada caso, almenos uno de ellos se conservó. En las MTs obtenidascon el método de punch biopsia no hubo pérdidas detejido. Los resultados de todas las tinciones realizadasfueron óptimos. CONCLUSIONES: Estos dos métodos manuales de elaboraciónde MTs resultan relativamente sencillos y soneconómicos. La tasa de pérdida de tejido es sólo significativaen el primero de los métodos pero se puedecompensar incluyendo varios cilindros de cada bloquedonante. En el segundo método no han existido problemasdestacables en la fase de microtomía.

Inversiones cromosómicas (anomalías estructurales poco frecuentes) asociadas a fenotipo normal, dudoso y patológico / Chromosomal inversions (Slight structural anomalies) associated to normal, doubtfull and pathological phenotypes

Las inversiones son reordenamientos intracromosómicos originados por dos rupturas en un cromosoma seguidas de la reinserción del fragmento rotado en 180º. Dependiendo si involucra o no al centrómero pueden ser pericén tricas o paracéntricas. La incidencia es 0.09 a 0.49/1.000. Las inversiones son rearreglos estructurales aparentemente equilibrados, por lo que la mayoría de los individuos portadores tienen fenotipos normales y una minoría tienen fenotipos patológicos (probablemente por alteración en la secuencia de genes o variación en la función de éstos por efectos de cambio de posición). Se presentan tres casos de inversiones detectas por la técnica de Bandeo G y confirmadas por Hibridación In Situ Fluorescente (FISH). Caso 1: INVERSION PARACENTRICA FAMILIAR DEL CROMOSOMA 13 ASOCIADA A RETRASO MENTAL Y DISMORFIAS. El exhaustivo análisis del árbol genealógico y el estudio cromosómico al mayor número posible de individuos permitió confirmar la asociación inversión/fenotipo patológico en este grupo familiar. 13 de 17 miembros son portadores de inv(13)(q31q32)inh.ish inv(13)(q31q32) (wcp13+). Caso 2: INVERSION PARACENTRICA DEL CROMOSOMA 6 DE NOVO EN RECIEN NACIDO CON RETRASO MADURATIVO GLOBAL Y RETRASO DEL CRECIMIENTO INTRAUTERINO. En este caso no es posible adjudicar que, el fenotipo afectado se deba a la inversión. Cariotipo: 46,XY,add(6)(q21)dn.ish inv(6)(q21q27)(wcp6+). Caso 3: INVERSION PERICENTRICA DEL CROMOSOMA 12 EN OVODONANTE. Dicha inversión no parece tener efecto sobre el fenotipo, ya que es una paciente con coeficiente intelectual normal y no presenta malformaciones congénitas. Cariotipo: 46,XX,inv(12)(p12q14).ish inv(12) (p12q14)(wcp12+). Este reporte de casos muestra los tres fenotipos posibles de una inversión: patológico, dudoso y normal. Es el primer reporte de una inv(13) que confiera fenotipo patológico.

The inversions are intrachromosomal rearrangements which occur when a single chromosome undergoes two breaks and the region between it's rotates 180 degrees before rejoining. Depending on whether or not it include the centromere, they can be pericentric or paracentric. The incidence is 0.09 to 0.49/1,000. The inversions are apparently balanced structural rearrangements, so the most of the carrier individuals show normal phenotypes and a minority have pathological phenotypes (probably due to variation in their function due to changes in position). Three cases of inversions detected by the G Banding technique and confirmed by Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) are presented. Case 1: FAMILIAL PARACENTRIC INVERSION OF CHROMOSOME 13 ASSOCIATED WITH MENTAL RETARDATION AND DISMORPHIA. The exhaustive analysis of the pedigree and the chromosomal study to the greatest possible number of individuals confirmed the inversion/pathological phenotype association in this family group. 13 of 17 members are carriers of inv(13)(q31q32)inh.ish inv(13)(q31q32)(wcp13+). Case 2: PARACENTRAL INVERSION DE NOVO OF CHROMOSOME 6 IN NEWBORN WITH GLOBAL MATURITY DELAY AND DELAY OF INTRAUTERINE GROWTH. In this case it is not possible to adjudge that, the affected phenotype is due to the inversion. Karyotype: 46,XY,add(6)(q21)dn.ish inv(6)(q21q27)(wcp6+). Case 3: PERICENTRIC INVERSION OF CHROMOSOME 12 IN OVODONANT. This inversion does not seem to have an effect on the phenotype, since it is a patient with normal IQ and does not present congenital malformations. Karyotype: 46,XX,inv(12)(p12q14).ish inv(12) (p12q14)(wcp12+). This case report shows the three possible phenotypes of an inversion: pathological, questionable and normal. It is the first report of an inv(13) that confers pathological phenotype. Key words: chromosomal inversion, G Banding, phenotype, structural rearrangement, fluorescence in situ hybridization.

Factores clinicopatológicos asociados a la amplificación del genHER2/neu en pacientes con cáncer de mama HER2 2+ / Clinicopathological factors associated with the amplification of the HER2 /neu genein patients with breast cancer HER2 2+

Introducción. Un subgrupo de los carcinomas de mama sobreexpresa el receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico (HER2). La determinación de esta sobreexpresión se realiza por inmunohistoquímica. La dificultad de diagnóstico surge cuando el resultado es ambiguo (2+), haciendo necesario realizar hibridación in situ (ISH) para determinar la amplificación del gen HER2/neu. Objetivo. Determinar si la amplificación del gen HER2/neu en los casos HER2 2+, se encuentra asociado a factores clinicopatologicos pronósticos. Diseño. Estudio descriptivo de corte transversal. Institución. Servicio de patología quirúrgica, Hospital Guillermo Almenara Irigoyen. Lima, Perú. Participantes. Casos de cáncer de mama HER2 2+. Metodología. Se estudiaron 117 casos de cáncer de mama HER2 2+ diagnosticados entre los años 2010 2015, a los que posteriormente se les realizó ISH. Todos los datos fueron analizados con el programa estadístico SPSS 22. Se utilizó el test de Chi cuadrado para analizar la asociación entre las variables. Principales medidas de resultados. Factores asociados a la amplificación del gen HER2/neu. Resultados. La amplificación del gen HER2/neu se observó en 41% del total de casos. En estos, se observó con mayor frecuencia un grado histológico III (66%), compromiso ganglionar presente (61%), tamaño tumoral ≥ 2 cm (86%) y Ki 67 ≥ 20% (83%). Se encontró una asociación estadísticamente significativa con una edad ≥ 50 años (X2 test, P=0,004) y el grado histológico III (X2 test, P=0.017). Conclusión. La amplificación del gen HER2/neu en casos ambiguos está asociado a una edad ≥ 50 años y grado histológico III.

Introduction: A subgroup of breast carcinomas overexpress epidermal growth factor-2 (HER2). The determination of this overexpression is carried out by immunohistochemistry. The difficulty of diagnosis by this method arises when the result is ambiguous (2+), thus it is necessary to perform in situ hybridization (ISH) to determine the amplification of the HER2/neu gene. Objective: To determine if, in HER2 2+ cases, the amplification of the HER 2 / neu gene is associated with prognostic clinicopathological factors. Design: Observational, cross-sectional, descriptive study. Institution: Surgical pathology service, Guillermo Almenara Irigoyen Hospital. Lima, Peru. Participants: Cases of breast cancer HER2 2+. Methodology: We studied 117 cases of Her2 2+ breast cancer diagnosed between the years 2010 2015, to which ISH was subsequently performed. All the data were analyzed with the statistical program SPSS 22. The Chi-square test was used to analyze the association between the variables. Main results measures: Factors associated with the amplification of the HER2 / neu gene. Results: Amplification of the HER2 / neu gene was observed in 41% of the total cases. In these, a histological grade III (66%), lymph node involvement (61%), tumor size ≥ 2 cm (86%) and Ki 67 ≥ 20% (83%) were observed more frequently. A statistically significant association was found with an age ≥ 50 years (X2 test, P = 0,004) and histological grade III (X2 test, P = 0.017). Conclusion: Amplification of the HER2/ neu gene in ambiguous cases is associated with an age ≥50 years and histological grade III

Use of New Techniques in Addition to IHC Applied to the Diagnosis of Melanocytic Lesions, With Emphasis on CGH, FISH, and Mass Spectrometry.

Melanoma remains one of the most aggressive forms of cutaneous malignancies. While its diagnosis based on histologic parameters is usually straight forward in most cases, distinguishing a melanoma from a melanocytic nevus can be challenging in some instances, especially when there are overlapping clinical and histopathologic features. Occasionally, melanomas can histologically mimic other tumors and even demonstration of melanocytic origin can be challenging. Thus, several ancillary tests may be employed to arrive at the correct diagnosis. The objective of this review is to summarize these tests, including the well-established and commonly used ones such as immunohistochemistry, with specific emphasis on emerging techniques such as comparative genomic hybridization, fluorescence in situ hybridization and imaging mass spectrometry.

Eficacia de los inhibidores de ALK en dos casos con evaluación positiva por inmunohistoquímica y negativa por FISH / Efficacy of ALK inhibitors in two cases with positive evaluation by immunohistochemistry and negative by FISH

En el carcinoma de pulmón de células no pequeñas (CPCNP), la activación de ALK se produce por la formación de genes de fusión. El perfil clínico donde ocurre con más frecuencia corresponde a pacientes jóvenes, mayormente mujeres, no fumadores, histología de adenocarcinoma y ausencia de mutaciones de EGFR y KRAS. Su presencia se describe en el 3-10% de los CPCNP. La importancia de la determinación de ALK radica en que identifica un subgrupo de pacientes con un comportamiento biológico diferente, en los cuales el tratamiento con inhibidores específicos, como el crizotinib, ceritinib o alectinib, es más eficaz que los convencionales. Las alteraciones moleculares de ALK pueden identificarse por hibridación in situ (ISH), por inmunohistoquímica (IHQ) y por RT-PCR, aunque el FISH es el procedimiento diagnóstico de referencia a nivel clínico. Se examinaron 308 casos de CPCNP y se compararon los resultados por FISH e IHQ. De los 8 (3%) identificados con expresión positiva, sólo 6 presentaron el rearreglo de ALK. Se presentan dos casos clínicos con ALK positivo por IHC y FISH negativo, uno presentó respuesta al tratamiento dirigido y otro no. A pesar de que el FISH es el gold standard, se acepta el uso de IHQ ya sea para definir conducta como único test o para screening y ulterior confirmación por FISH en los casos positivos. Estos dos casos con distinta respuesta al tratamiento con IHQ positiva pero FISH negativo, indican la ausencia de pautas, requiriendo de más conocimiento en el futuro para optimizar las conductas médicas (AU)

In non-small cell lung cancer, ALK activation is produced by gene fusion. The clinical scenario where this type of tumor appears more frequently is in young, female patients, without smoking history, adenocarcinoma histology and with no EGFR or KRAS mutation. It is described as 3 to 10% of non- small cell lung cancer cases. The importance of ALK determinations lies in the identification of a subgroup of patients with a different biological behavior and sensible tumor to target therapy with ALK inhibitors. Molecular alterations of ALK can be determined by in situ hybridization, immunohistochemistry (IHC) and RT-PCR, FISH is the reference diagnostic procedure in clinical applications. Were evaluated 308 cases of non-small cell lung cancer, and FISH and IHC results were compared. Eight (3%) cases presented positive expression, but only 6 of them presented ALK rearrangements. These two clinical cases of patients with IHC positive but FISH negative for ALK are presented, observing good clinical response in only one of them. Although FISH is considered the gold standard technique, IHC use is accepted for treatment decisions as a lone procedure or as screening with FISH confirmation in positive cases. These two particular cases express the absence of guidelines in this infrequent scenario, needing more knowledge in the future in order to take better medical decisions (AU)

Caracterización de anomalías cromosómicas en pacientes con anomalías congénicas / Characterization of chromosomal abnormalities in patients with congenital anomalies

INTRODUCCIÓN Las anomalías cromosómicas son alteraciones en el número o estructura de los cromosomas y su diagnóstico se basa en la determinación del cariotipo. Se detectan en aproximadamente el 10% de las anomalías congénitas y afectan al 0,8-1% de los recién nacidos vivos. En general, las que afectan a los autosomas tienen consecuencias más severas que las de los cromosomas sexuales. Las de más compleja caracterización son el material cromosómico adicional y los cromosomas marcadores supernumerarios. Las técnicas de bandeo clásicas tienen limitaciones para la identificación precisa de muchas anomalías y en la actualidad, las técnicas de citogenética molecular como FISH, MLPA y SKY, sumadas a la técnica de arrayCGH han permitido establecer estrategias para su caracterización. OBJETIVO Caracterizar anomalías cromosómicas estructurales e identificar cromosomas marcadores en pacientes con anomalías congénitas. MÉTODOS Se seleccionaron al azar 30 pacientes estudiados en el laboratorio de citogenética entre los años 2010-2016, quienes presentaban anomalías estructurales o marcadores que no se pudieron caracterizar por citogenética clásica. Se aplicaron técnicas de citogenética clásica y molecular (FISH, MLPA y SKY). RESULTADOS Se resolvieron 5 pacientes con duplicaciones intracromosómicas, 7 con translocaciones desbalanceadas de novo, 2 con cromosomas en anillo, 6 con marcadores autosómicos, 2 con marcadores derivados de un cromosoma sexual y 5 con otras anomalías. Se excluyeron 3 pacientes por no cumplir con los criterios de inclusión. DISCUSIÓN La identificación y caracterización de anomalías cromosómicas y la determinación del cariotipo requieren de una combinación adecuada de técnicas de citogenética clásica y molecular. Se destaca la importancia de conocer la aplicabilidad y limitaciones de las mismas como herramienta para un diagnóstico certero, lo que constituye en definitiva la base del asesoramiento genético

Patrones de hibridación del gen de fusión BCR/ABL1 en pacientes cubanos con leucemia / Hybridization patterns of BCR / ABL1 gen in cuban patients with leukemia

Introducción: la leucemia mieloide crónica (LMC) se caracteriza por la presencia de la translocación t(9,22) que resulta en la formación del gen de fusión BCR/ABL1. En ocasiones esta alteración genética puede asociarse con deleciones en secuencias del cromosoma 9 derivativo y otras variantes que no se observan con la citogenética convencional, pero pueden ser detectadas mediante la técnica de hibridación in situ por fluorescencia (FISH). Objetivo: describir los patrones de hibridación en pacientes positivos a la t(9;22) a partir de la introducción de la técnica de FISH para el estudio de las leucemias en Cuba. Métodos: se estudiaron muestras de sangre medular de 36 pacientes con LMC y ocho con leucemia linfoblástica aguda (LLA), en el Instituto de Hematología e Inmunología. Se empleó la sonda LSI BCR/ABL1 Dual Color Dual Fusion. Resultados: entre los pacientes con LMC, dos muestras resultaron no útiles para el diagnóstico y 18 fueron positivas para el BCR-ABL1, una de ellas mostró un patrón de hibridación atípico. Todas las muestras de pacientes con LLA resultaron negativas. En un paciente con impresión diagnóstica de LMC BCR-ABL1 negativo, se observó un patrón de señales que sugiere trisomía del cromosoma 9. Conclusiones: la incorporación de la técnica de FISH para el estudio del transcripto BCR/ABL1 en pacientes con LMC y LLA permitió detectar su presencia y la existencia de patrones de señales atípicos, los que pudieran no ser detectables mediante la citogenética convencional y tener significación pronóstica(AU)

Introduction: Chronic myeloid leukemia (CML) is characterized by the t(9;22) translocation resulting in the formation of BCR/ABL1 fusion gen. Sometimes this genetic alteration can be associated to deletions in sequences of derivative chromosome 9 and other variants detected by fluorescence in situ hybridization (FISH) technique. Objective: To describe hybridization patterns in patients positive to t(9;22) after the introduction of FISH at the leukemia study in Cuba. Methods: The bone marrow samples of 36 patients with diagnosis of CML and eight patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) were studied at the Cytogenetics Laboratory of the Institute of Hematology and Immunology. The BCR/ABL Dual Color Dual Fusion probe was used. Results: The sample of two CML patients were non-useful for diagnosis and 18 were t(9;22) positive, one with an atypical pattern of signals. All the ALL patients were negative. In one negative CML patient was observed a pattern of signals suggestive of trisomy 9. Conclusions: Incorporation of FISH for the BCR/ABL1 transcript study in CML and ALL patients allowed us to detect its presence and the existence of different patterns of signals which could be no detectable by conventional cytogenetic and could have prognostic significance(AU)

Hibridación in situ fluorescente: herramienta en el diagnóstico de las hemopatías malignas / Fluorescence in situ hybridization: diagnostic tool for hematological malignancies

Introducción: las neoplasias hematológicas tienen origen clonal y se caracterizan por presentar gran heterogeneidad genética. El desarrollo de la citogenética molecular a través de la hibridación in situ por fluorescencia (FISH, por su sigla en inglés) se convirtió en un avance importante en el diagnóstico citogenético de estas neoplasias. Objetivo: describir las alteraciones cromosómicas detectadas en pacientes con neoplasias hematológicas a partir de la introducción de esta técnica. Métodos: se realizó un estudio descriptivo de tipo transversal de pacientes con neoplasias hematológicas en el Laboratorio de Citogenética del Instituto de Hematología e Inmunología (IHI), en el período comprendido entre julio de 2014 y abril de 2015. Se utilizó la técnica de FISH con las sondas fluorescentes específicas. Resultados: se estudiaron 87 muestras correspondientes a diferentes tipos de neoplasias hematológicas. Con la sonda LSI BCR/ABL se observaron 18 casos positivos de leucemia mieloide crónica y los ocho pacientes con leucemia linfoide aguda fueron negativos. Se marcaron con sonda PML/RARα 17 muestras con diagnóstico de leucemia promielocítica: 10 fueron positivas. Se procesaron 8 muestras con la sonda LSI RUNX1/RUNX1T1, una resultó positiva. Dos muestras marcadas con sonda LSI RB1 (13q14) y una con LSI TP53 (17p13.1), resultaron negativas. se observó un caso positivo de deleción 7q31. Conclusiones: a pesar de que la muestra estudiada es pequeña, resulta importante reportar los primeros resultados como evidencia de la incorporación de la técnica de FISH en el IHI, lo que constituye una nueva herramienta para el diagnóstico, pronóstico y seguimiento de las neoplasias hematológicas(AU)

Introduction: hematological neoplasias have clonal origin and are characterized by great genetic heterogeneity. The development of molecular cytogenetic through fluorescence in situ hybridization (FISH) became a major advance in the cytogenetic diagnosis of these neoplasias. Aim: to describe chromosomal abnormalities detected in patients with hematological malignancies after the introduction of this technique. Methods: a descriptive cross-sectional study of patients with hematological malignancies was performed. Their bone marrow samples were processed at the Laboratory of Cytogenetics of the Institute of Hematology and Immunology, between July 2014 and April 2015. FISH technique was used along with various fluorescent probes. Results: 87 samples were studied. With LSI BCR / ABL probe, 18 samples were positive of chronic myeloid leukemia and 8 patients with diagnostic of acute lymphoblastic leukemia were negative. With PML/RARα probe 17 samples of patients with promyelocytic leukemia were labeled, 10 were positive. Eight samples were labeled with probe RUNX1 / RUNX1T1, one was positive. Two samples for LSI probes labeled RB1 (13q14) and one with LSI TP53 (17p13.1) were negative. One positive case 7q31 deletion was observed. Conclusions: despite the sample is small, we consider it important to report our first results as evidence of the incorporation of the FISH technique at the IHI, which constitutes a new tool for the diagnosis, prognosis and monitoring of hematological malignances(AU)

Evaluación de la amplificación del oncogén HER2 en pacientes con cáncer de mama a través de la técnica de hibridación in situ cromogénica (CISH) / Evaluation of HER2 oncogene amplification in breast cancer patients through technical chromogenic in situ hybridization

El protooncogén HER2 se encuentra localizado en el cromosoma 17. Codifica una glicoproteína transmembrana llamada receptor del factor de crecimiento epidérmico humano 2 (HER2). Está amplificado a bajos niveles en muchos tejidos normales y regula el crecimiento, diferenciación y muerte celular. La sobreexpresión de HER2 es el resultado de anormalidades en la amplificación del oncogén HER2. El objetivo de este trabajo fue evaluar la amplificación del oncogén HER2 en pacientes con cáncer de mama a través de la técnica de hibridación in situ cromogénica (CISH). La muestra estuvo constituida por 200 biopsias fijadas en formol al 10%, procesadas por las técnicas habituales hasta la inclusión en parafina, correspondientes a pacientes diagnosticadas con carcinoma ductal infiltrante de la mama, procedentes de consulta privada y del Instituto de Oncología "Dr. Miguel Pérez Carreño", con estudio inmunohistoquímico realizado en el Hospital Metropolitano del Norte en Valencia. Se encontró una asociación estadísticamente significativa (p<0,001) de la amplificación de HER2 con los diferentes niveles cuantitativos del producto de expresión del gen. Cabe destacar que hubo 16 (11%) de 146 casos considerados negativos desde el punto de vista inmunohistoquímico para la expresión de HER2, que resultaron amplificados para el oncogén a través de la CISH. Asimismo, más de la mitad (52,4%) de los casos positivos (3+) no presentaron amplificación. Este estudio demuestra la importancia de realizar la determinación de la amplificación de HER2 en los casos con resultado de 1+ por inmunohistoquímica, al evidenciar que el 12,3% de los casos son positivos a la amplificación del oncogén.

HER2 proto-oncogene is located on chromosome 17. It encodes a transmembrane glycoprotein called human epidermal growth factor receptor 2 (HER2). It is amplified at low levels in many normal tissues and regulates growth, differentiation and cell death. HER2 overexpression is the result of abnormalities in the HER2 oncogene amplification. The aim of this study was to evaluate the HER2 oncogene amplification in patients with breast cancer through the chromogenic in situ hybridization (CISH) technique. The sample consisted of 200 biopsies fixed in 10% formalin, processed by standard techniques to paraffin embedding, from patients diagnosed with infiltrating ductal carcinoma of the breast, coming from private practice and the Institute of Oncology "Dr. Miguel Pérez Carreño", with immunohistochemical study performed at Northern Metropolitan Hospital in Valencia. It was found a statistically significant association (p<0.001) of HER2 amplification with different quantitative levels of the product of the gene expression. It is noteworthy that there were 16 (11%) of 146 cases considered negative from the immunohistochemical point of view for the HER2 expression, that proved to be amplified for the oncogene through the CISH. Likewise, it is emphasized that more than half (52.4%) of the positive cases (3+) showed no amplification. This study shows the importance of the determination of HER2 amplification in cases result of 1+ by immunohistochemistry, demonstrating a 12.3% positive for these cases to the oncogene amplification.

[Chromosomal location of submicroscopic duplications in patients with neurodevelopmental disorders to identify cases with high risk of familial recurrence]. / Localización cromosómica de duplicaciones submicroscópicas en pacientes con trastornos del neurodesarrollo para identificar casos con alto riesgo de recurrencia familiar.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: An important proportion of neurodevelopmental disorders (NDDs) results from unbalanced genomic alterations (duplication or deletion). These chromosomal rearrangements may be considered as de novo, despite they arise as a result of a balanced rearrangement not detected in a phenotypically normal parent. Therefore, if the rearrangements are inherited, the recurrence risk and the genetic counseling of these cases change radically. Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique that allows detecting both balanced and unbalanced rearrangements, identifying also the location of duplicated segments. We tried to locate in the genome the duplicated segments detected in patients with NDDs in order to identify those cases due to inherited rearrangements. PATIENTS AND METHOD: The study was conducted in 13 patients with NDDs and genomic duplications detected by compared genomic hybridization-array (CGH-array). Two approaches of FISH technique were taken: hybridization with painting chromosome probes and with specific probes for each duplication. RESULTS: In the studied series of 13 patients with duplication, 11 patients were found to carry tandem duplications, one with an intrachromosomal insertional translocation, and another with an interchromosomal insertional translocation. Therefore, 2 of the duplications considered de novo were actually an unbalanced rearrangement inherited from a parent who is a balanced carrier. CONCLUSION: The results illustrate the need to characterize by FISH technique the rearrangements that are detected by CGH-array to identify those cases with a high risk of recurrence.